什么是G418？

G418（遗传霉素）是一种氨基糖苷类抗生素，来源于细菌 Micromonospora rhodorangea。它的作用机制是与真核细胞80S核糖体结合，干扰核糖体功能，从而阻断蛋白质合成，导致细胞死亡。

当细胞成功转染携带 neo 抗性基因的载体后，会表达氨基糖苷磷酸转移酶，该酶可使G418失活，从而使细胞获得在含G418的选择性培养基中生长的能力。正因为这一特性，G418成为哺乳动物稳定细胞株构建中最经典、应用最广泛的筛选抗生素之一。

G418 与新霉素同为氨基糖苷类抗生素，都可被 Neo 基因产物失活，因此都可以用于筛选携带 Neo 抗性基因的细胞，新霉素筛选的细胞都可以用 G418 替代。

市面上常见的G418产品主要有两种形态：即用型溶液（KP14019）和盐酸盐粉末（KM2293），KKL提供高纯度、稳定性好的抗生素产品

G418即用型溶液（50mg/mL）使用指南

使用注意事项

1. 严禁反复冻融：建议将大包装分装成单次使用量（如 500 μL/管），于 -20℃ 避光保存。反复冻融会显著降低效价。

2. 避光保存：G418 对光敏感，应使用铝箔包裹或存放于避光处。

3. 取用前平衡：从 -20℃ 取出后，建议在室温平衡 15–30 分钟后再开盖，避免冷凝水进入造成污染。

计算公式：C₁ × V₁ = C₂ × V₂

配制速查表（以 50 mg/mL 储存液为例）：

工作浓度的确定——杀灭曲线是“铁律”

任何细胞系首次使用 G418，都必须通过杀灭曲线（Kill Curve）实验确定最佳筛选浓度。 直接套用文献浓度是实验失败最常见的原因。

杀灭曲线操作流程：

1．将未转染的细胞以约 20–25% 的密度铺于 24 孔板。

2．设置 G418 浓度梯度：0、50、100、200、400、600、800、1,000 μg/mL（可根据细胞类型调整）。

3．每 3–5 天更换新鲜含药培养基，持续筛选 7–14 天。

4．选择能杀死 所有 未转染细胞的最低浓度，即为最佳筛选浓度。

5．药效延迟提醒：即使加入有效浓度的 G418，细胞仍可能继续分裂 2–3 次，药效通常在 2 天后 才变得明显。对照细胞通常需要 5–7 天 才会被完全杀死。

部分常见哺乳动物细胞的推荐工作浓度

【注意事项】切勿将 G418 与青霉素/链霉素（Pen/Strep）或其他抗生素/抗真菌剂混合使用！因为这些抗生素是 G418 的竞争性抑制剂，会降低 G418 的筛选效率。如果培养基中已有 Pen/Strep，需更换为不含 Pen/Strep 的培养基再进行 G418 筛选。

G418 盐酸盐粉末使用指南

常见问题（FAQ） 

G418 的推荐筛选浓度是多少？

没有统一标准。哺乳动物细胞通常为 200–2,000 μg/mL，具体浓度必须通过杀灭曲线确定。

筛选出的抗性克隆如何维持？

将 G418 浓度 减半 进行维持培养。

筛选需要多长时间？

抗性克隆通常在 10–14 天 内形成。

可以用 G418 代替新霉素吗？

可以。两者都被 neo 基因产物失活，但 新霉素对哺乳动物细胞有毒性，不适合用于哺乳动物细胞筛选。

为什么杀灭曲线中对照组细胞没有被全部杀死？

可能原因：① 药物浓度过低；② 细胞密度过高（密度过高会降低药效）；③ 筛选时间不足（需要 7–14 天）；④ 培养基中含有青霉素/链霉素等竞争性抑制剂

含 G418 的培养基可以保存多久？

建议 现用现配。如需保存，4℃ 下不超过 1–2 周。

G418 溶液出现沉淀怎么办？

可能因保存不当导致降解或析出。建议停止使用，重新配制。

配制储存液时用什么溶剂最好？

推荐 100 mM HEPES（pH 7.3）。使用 HEPES 配制的优点是不会改变培养基的 pH 值。

G418 的作用原理是什么？

G418 通过结合 80S 核糖体，干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成。neo 抗性基因编码的氨基糖苷磷酸转移酶可使 G418 失活，保护细胞。

如何确定最佳筛选浓度？

必须通过 杀灭曲线（Kill Curve） 实验确定。设置 5 个以上浓度梯度（如 0、50、100、200、400、600、800、1,000 μg/mL），筛选 7–14 天，选择能杀死所有未转染细胞的最低浓度。

G418 可以和其他抗生素一起使用吗？

不建议。G418 不要和青霉素/链霉素等其他抗生素/抗真菌剂共同使用，因为这些抗生素是 G418 的竞争性抑制剂，会降低筛选效率。

筛选过程中细胞密度过高有什么影响？

细胞密度过高会显著降低 G418 的杀伤效率。快速分裂的细胞更容易被杀死。加药筛选时务必控制细胞密度。

为什么加入 G418 后细胞没有立即死亡？

即使加入有效剂量的 G418，细胞可能仍会继续分裂 2–3 次，药效通常在 2 天后才变得明显。对照细胞通常需要 5–7 天才会被完全杀死。

为什么多次购买后，统一浓度使用效果有差异？

不同批次 G418 粉末的活力值（效价）不同。使用相同的浓度进行实验可能会导致实际药效 浓度不准确，建议实验一次性完成，或致电KKL获取两次产品效价数值。