MK-2206 dihydrochloride 是一种口服活性、可透过血脑屏障的变构AKT抑制剂。
其作用机制为非ATP竞争性的变构抑制—药物结合于AKT的PH结构域与激酶结构域之间的变构位点，将AKT锁定在闭合的非活性构象，从而阻断其向膜募集及后续磷酸化激活，这一点区别于ATP竞争性抑制剂（如GDC-0068）的作用模式。
目录号：KM8231
靶点：AKT1 IC50 = 8 nM，AKT2 IC50 = 12 nM，AKT3 IC50 = 65 nM（pan-AKT）
作用通路：PI3K/Akt/mTOR
下游效应
药物抑制AKT/mTOR信号通路后，经蛋白酶体降解途径降低下游GSK3β和Mcl-1的水平，并诱导G1期细胞周期阻滞、凋亡、上皮-间质转化、成纤维细胞活化及细胞外基质沉积。
在动物体内，MK-2206可引起短暂的高血糖和高胰岛素血症—这是PI3K/AKT通路被抑制后的药效学标志性事件。
从信号层面看，MK-2206对AKT的抑制呈现浓度依赖性去磷酸化特征。Western blot分析证实，药物处理后p-AKT（Ser473）和p-AKT（Thr308）水平显著下降，而总AKT蛋白水平保持不变，同时下游靶点GSK-3α/β和FOXO3A的磷酸化也呈浓度依赖性降低。
药代动力学参数
MK-2206在人体中的半衰期约为 55–81 小时，中位Tₐₓ为 6–8 小时
药效对比：
在使用源自低级别黏液表皮样癌（MEC）的原代细胞进行直接头对头比较时，MK-2206（剂量范围 1.2-40µM，2D 和 3D 培养，三种不同培养基） 相较于 ATP 竞争性泛 AKT 抑制剂 GSK690693（目录号：KM2435） 表现出显著更优的抗增殖活性。MK-2206 在多种培养条件以及 2D 和 3D 细胞培养模型中均诱导了显著更大的细胞活力降低。
常用剂量
体外剂量：
常用体外使用剂量：0.3 µM to 10 µM
不同细胞系对MK-2206的敏感性差异较大，实验中应通过CCK-8或MTT实验预先确定目标细胞系的 IC50。文献报道的参考范围如下：
乳腺癌细胞系
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细胞系 |
IC50 |
处理时间 |
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MDA-MB-468 (PTEN缺失) |
IC₅₀ ≈ 0.3 μM |
72h |
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MCF-7 (PTEN表达) |
IC₅₀ ≈ 0.8 μM |
72h |
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16种乳腺癌细胞系 |
5/16细胞系 IC₅₀ < 500 nM |
72h |
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MDA-MB-231, SKBR3, HCC1569 |
IC₅₀ 1.24–2.29 μM |
72h |
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MCF-10A (正常乳腺上皮) |
IC₅₀ ≈ 113 μM |
72h |
PIK3CA突变或PTEN缺失的乳腺癌细胞系对MK-2206显著更敏感（5/9敏感 vs. 0/7野生型敏感，P=0.0337）。PTEN敲低可使MDA-MB-231和SKBR3细胞的生长抑制显著增强.。
鼻咽癌细胞系 (NPC)
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细胞系 |
IC50 |
处理时间 |
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CNE-1, CNE-2, HONE-1 |
3–5 μM |
72–96 h |
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SUNE-1 |
< 1 μM |
72–96 h |
实验细节：CNE-2和HONE-1细胞常用 0.625–10 μM 浓度范围处理24–48 h进行细胞周期分析，可见G0/G1期剂量依赖性增加。信号通路研究中，1~10 μM 处理24 h可剂量依赖性减弱PRAS40和S6磷酸化
胶质母细胞瘤细胞系
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细胞系 |
IC50 |
处理时间 |
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U87MG |
1 μM |
1 h |
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LN-229, LN-18 |
5 μM |
24h |
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T98G, U343 |
2–4 μM |
\ |
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U87, U251 |
1 0μM |
\ |
浓度差异提示：U87MG在1 μM下1 h即可完全抑制Akt磷酸化，但细胞活力实验（如72 h）常需更高浓度（5–10 μM）
肝癌细胞系
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细胞系 |
有效浓度 |
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Huh7 |
0, 2.5, 5, 10, 20, 40 μM |
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Hep3B, HepG2, Huh7 |
1.7 μM（完全消除Akt磷酸化） |
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SK-Hep1-SR |
0, 1, 2, 4, 8, 16 μM |
前列腺癌细胞系
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细胞系 |
IC50 |
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LNCaP |
~1 μM |
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PC-3 (PTEN缺失) |
~5–10 μM |
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LNCaP (敏感 vs. 耐药) |
敏感 ~0.5 μM / 耐药 >10 μM |
浓度范围参考：
大多数实体瘤细胞系的常用工作浓度为 1–10 μM，处理时间 24–72 h。对于信号通路检测（Western blot），较低浓度 100 nM–1 μM 即可在数小时内有效抑制AKT磷酸化。若研究细胞表型（增殖、凋亡、周期阻滞），建议采用 5–10 μM 处理24–48 h。
敏感性预测：PIK3CA突变或PTEN缺失的细胞系通常对MK-2206更敏感。在正式实验前，建议通过CCK-8或MTT实验确定目标细胞系的IC50，参考浓度梯度可设为 0.01–30 μM，每个浓度3个复孔。
体内剂量：
小鼠异种移植瘤模型中的推荐给药方案：
单药方案：120 mg/kg，口服灌胃，每周3次（周一/三/五），或 240 mg/kg 每周1次。也有文献采用 50 mg/kg 每周2次（溶解于15% Captisol），持续5周的方案。
联合用药方案：120 mg/kg 与厄洛替尼（50 mg/kg，PO，周一至周五）联用，在NCI-H292 NSCLC异种移植模型中实现了显著的肿瘤消退。
需注意，120 mg/kg 每周3次的单药方案在该模型中疗效有限，而 360 mg/kg 每周1次方案仅产生中等抗肿瘤效果。
溶液配制
溶解度：DMSO : 12.5 mg/mL (26.02 mM; ultrasonic and warming and heat to 60°C)
1、配制母液(10mM)
（一）若直接购买KKL成品，5mg/10mg/50mg,在低速离心后直接开盖加入DMSO溶液：1.04/20.8/10.4mL。
若需要分装在化学通风橱内，使用校准天平称取所需量的MK-2206粉末。例如，为配制1毫升1mM的储备液，需称取4.804毫克MK-2206二盐酸盐。
https://www.kklmed.com/product/8231.html
KKL官方主页配备专业配溶计算器:
（二）充分涡旋溶液直至固体完全溶解。如有必要，可轻轻加热（例如在37°C水浴中）以辅助溶解。
将母液分装到无菌微量离心管中，分成小体积的单次使用量，以避免反复冻融循环。
（三）将分装后的溶液储存在-20°C下进行短期保存（最长1个月），或储存在-80°C下进行长期保存（最长6个月）。
2、细胞实验工作液
（一）在室温下解冻一管10 mM MK-2206母液。
（二）在细胞培养基中对母液进行梯度稀释，以达到所需的最终浓度。建议进行中间稀释以确保准确性
（三）为尽量减少DMSO引起的细胞毒性，确保细胞培养基中DMSO的最终浓度低于0.5%，理想情况下低于0.1%。
（四）在实验中务必包含一个溶剂对照组，该对照组使用与所用最高浓度MK-2206最终浓度相同的DMSO配制的细胞培养基。
（五）将MK-2206的最终工作液添加到细胞培养物中，并孵育至实验所需的时长。例如，在细胞增殖实验中，细胞可使用MK-2206处理72至96小时。
3、动物实验工作液配置
（一）MK-2206通常制成口服剂型。常用赋形剂为30% Captisol。每次给药日需现配药物悬浮液。
（二）称量每只小鼠的体重，以确定要给药的药物悬浮液的准确体积。
（三）通过口服灌胃给药MK-2206。剂量范围可从100 mg/kg到240 mg/kg或更高，给药频率可为每周两次、每周三次或每周一次。
对照组应仅接受溶剂，给药体积和频率应与治疗组相同。
